產(chǎn)品名稱 |
人原代軟骨細(xì)胞永生化 |
商品貨號(hào) |
MZ-4029 |
中文名稱 |
人原代軟骨細(xì)胞永生化 |
組織來源 |
人的關(guān)節(jié)組織 |
形態(tài)特征 |
長梭形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞 |
生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
特征特性 |
軟骨細(xì)胞存在于關(guān)節(jié)軟骨中,負(fù)責(zé)分泌II型膠原和其它類型的膠原以及非膠原的細(xì)胞外基質(zhì)大分子。成軟骨細(xì)胞的增殖和分化與脊椎動(dòng)物骨架的發(fā)育有著密切的關(guān)系。軟骨細(xì)胞能分泌和響應(yīng)一系列的生長因子,包括IGF-1和IL1。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞是研究軟骨修復(fù)和關(guān)節(jié)炎病理的有用模型 |
細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
培養(yǎng)條件 |
軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系 |
細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
復(fù)蘇細(xì)胞步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |