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大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞

大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞特性

1) 含量:>1x106 個/mL

2) 生長特性:貼壁

3) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

收到細(xì)胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理:

1) 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3) T25瓶中的培養(yǎng)基取出離心后,去上清,添加6ml新的完全培養(yǎng)基,重新加入原T25培養(yǎng)瓶。

4) 如果細(xì)胞長滿90%請及時進行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備高糖DMEM +10%FBS+1%P/S

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至6ml。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 將上清取出,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出,和上清一起在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為類;

1,細(xì)胞凍存時,取出上清,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項:

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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